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小體積移液:應用于化合物
管理、篩選和工作流程的驗證.

化合物管理、篩選和驗證工作流程通常包括四種不同的小體積移液操作:

  • 隨機挑取:從來源于微孔板和試管的化合物庫中挑取化合物并進行重排;
  • 孔板重排:適用于96、384和1536孔板
  • 連續或者直接的梯度稀釋:用于劑量反應實驗
  • 矩陣點樣:創建用于實驗板的重復孔

 

盡管利用聲波液滴噴射和數字化分液器無疑是創建化合物稀釋系列的較好選擇,但它們仍然依賴上游液體處理步驟來挑選化合物并將其轉移到專門的源板或盒中。 此方法雖然可以從僅有一種試劑的源板中創建多個實驗板,但該過程可能很費力。

小體積、以固相置換為原理的液體工作站如mosquito LV和mosquito X1不僅是以聲波和數字化分配為原理的工作站的有效替代(并能對其進行補充),還擁有以下獨特優勢:

  • 死體積極低,每孔僅為0.5 uL
  • mosquito LV:在一臺機器上可同時實現梯度稀釋、重排、矩陣點樣以及為聲波加樣創建源板
  • mosquito X1:可以完成從微孔板或試管中進行多功能和小體積的隨意挑取

實驗體系的微縮化.

隨著更多疾病生理模型(例如 3D 細胞培養)和研究疾病生物學的新技術(例如 CRISPR-Cas9 基因編輯和二代測序)的廣泛應用,檢測試劑的成本在顯著增加。

實驗體系的微縮化是降低試劑成本的有效途徑。將反應體系從 96 孔板轉換為 384 孔板通常可節省 4 倍以上的試劑,而從 96 孔板轉換為 1536 孔板更可降低約 10 倍。這些成本效益有助于實現更高價值的研究、增加實驗項目的產出并提高實驗室的投資回報。以固相置換為原理的mosquito液體工作站和dragonfly多功能分液器是進行準確和精確實驗體系微縮化的理想工具。通過微縮化,研究人員能夠在不影響檢測質量或數量的情況下,最大限度地發揮昂貴試劑的價值。

常見問題與解釋.

哪些實驗類型適合微縮化?

如不能微縮化至1536孔板,大多數實驗類型(生化、細胞學和基因組學等)至少都可以微縮化至384孔板。對于小體系實驗而言,必須減少蒸發的影響,以確保始終如一的高質量檢測結果。通常,這些主要通過分液速度、主動或被動制冷模塊和使用減低蒸發的屏障來實現。

在確定反應劑量時,我應該使用連續梯度稀釋還是直接的化合物梯度稀釋?

視情況而定。連續梯度稀釋比直接梯度稀釋更快,也更容易建立。由于每個稀釋點都取決于前一個點,因此存在累積重大誤差的風險。選擇此方法時,用戶必須確保其儀器的移液性能符合嚴格的質量指標。對于直接梯度稀釋而言,所有的稀釋點都是獨立建立的。雖然該方法不存在累積誤差的風險,但沒有一臺儀器具有設置3-4 log稀釋點所需的量程范圍。因此,直接梯度稀釋時,用戶需要準備中間稀釋液。

我需要擔心靜電影響嗎?

小液滴容量易受到靜電干擾,容易使液滴在孔板上發生反彈或偏轉。接觸式分液器往往不會受到靜電問題的影響,因為液滴在接觸模式下幾乎沒有不會發生偏轉。非接觸式分液器可能會在納升級分液范圍內和非常干燥的環境下(水分子會減少電荷積聚)產生更加明顯的靜電問題。如果擔心靜電干擾,研究人員可以使用各種工具,如電離風扇或防靜電槍來消除電荷積聚。在某些情況下,只需將微孔板放在濕紙巾上幾分鐘就足以最大限度地減少靜電影響。

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